C’est l’un des musées incontournables de Prague où les chefs-d’œuvre voisinent les chefs-d’œuvre, principalement dans les premières salles consacrées aux sculptures et peintures du XIVème siècle, le siècle de Charles IV qui fut l’un des âges d’or de la création artistique en Bohême.
Dans le cadre splendide du couvent Sainte-Agnès, le plus ancien édifice gothique de la ville, sont exposées les œuvres des artistes majeurs de cette époque : le maître anonyme du cycle de Vyšší Brod à la richesse iconographique et symbolique étonnante, le maître Théodoric dont les portraits incarnent avec génie la vision théologique et politique de l’empereur Charles IV et le maître de Třeboň aux œuvres baignées d’un mysticisme et d’un lyrisme sans précédent.
L’art de Bohême aux XVème et XVIème siècles, après le cataclysme des guerres hussites qui ravagèrent le pays, est peut-être moins riche en chefs-d'oeuvre mais la présentation, fondée sur une comparaison avec les autres foyers de création de l’époque en Europe, ne manque pas d’intérêt.